pcr技术最关键的地方、?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/02 11:22:19
pcr技术最关键的地方、?

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酶、
引物

酶、
引物

引物现在设计都是靠软件的,输入上下游各超过你目的片段的500bp以上,打分值一般都会很好的,选择一下最适合的,一般TM值大于55度不超过60度。但是我认为PCR关键是批出特异的基因条带,首先要保证样品没有基因组污染,因为我们是靠RNA逆转录成cDNA扩增的,因此如果有基因组污染的话,对后续的测序,表达量的观察都有很大的影响。但是我们要是设计跨内含子的引物,就可以避免基因组污染的扩增物。另外如果片段...

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引物现在设计都是靠软件的,输入上下游各超过你目的片段的500bp以上,打分值一般都会很好的,选择一下最适合的,一般TM值大于55度不超过60度。但是我认为PCR关键是批出特异的基因条带,首先要保证样品没有基因组污染,因为我们是靠RNA逆转录成cDNA扩增的,因此如果有基因组污染的话,对后续的测序,表达量的观察都有很大的影响。但是我们要是设计跨内含子的引物,就可以避免基因组污染的扩增物。另外如果片段过长,或是要拿到基因全长的扩增一般都很难,因为在非翻译区的扩增,CG含量都很高,可以试着用巢式PCR,超过1000bp的尽量用LATaq酶,因为要保证碱基准确,为了后续测序实验做准备。

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